GPC色谱柱的清洗过程跟重生过程不一样,如果仅仅是洗前次进样的残留,可以根据流动相的比例组成冲洗一段时间(如果含缓冲盐的话,直接用水相代替原先含盐的水相即可),一般冲洗20个柱体积。然后在过渡到封柱比例的甲醇、乙腈溶液即可。GPC色谱柱冲洗的问题。我来谈谈我自己的一点意见,主要针对的反向GPC色谱柱而讲的。
1.一般情况都是冲洗GPC色谱柱20倍柱体积,具体可以这样计算,根据柱内径和柱长算出GPC色谱柱内体积。短柱一般时间就是30分钟就可以了啊!流速是1.0毫升每分钟。
2.冲洗GPC色谱柱**在分析结束后,用流动相冲洗到基线平稳,然后用10%左右的有机溶剂冲洗GPC色谱柱,主要是冲洗干净流动相中的缓冲盐。然后用100有机溶剂冲洗。**是梯度变化冲洗。分析物可能为一些能溶解在水中,有些需要用纯溶剂才能完全去除。如果分析时间紧迫一定要把盐分冲洗干净,一般情况不要用纯水冲洗GPC色谱柱,特别是反向柱的填料的键合集团容易折断,对GPC色谱柱造成损伤。
3.GPC色谱柱被使用在某种程度上就是开始被污染了,所以GPC色谱柱的寿命和我们使用的情况有很大的关系。虽然被污染但是对我们分析目标物没有造成影响我们也就是认为还能用。
4.前面谈到的不管用什么溶剂一定要加入一定比例的用机溶剂,主要是考虑到一些疏水基团在有机溶剂里面容易伸展利于冲洗其包藏的杂质等。当我们的GPC色谱柱在压力和柱效下降时,我可以拆开泵近端柱头的螺丝取出筛板,清洗筛板以及观察里面的填料,如填料污染严重,就要进行挖取一部分被污染的填料然后用其他废弃的柱子相同填料来填补,用新的筛板或清洗好的筛板拧好螺丝。然后冲洗观察柱压变化和测试柱效等。
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